本文參照《動(dòng)物性食品中碘醚柳胺殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（征求意見(jiàn)稿）》，利用EZsepTM MAX固相萃取柱（60 mg/3mL，貨號(hào)：PZ12802）凈化樣液，再通過(guò)高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)，建立了一種對(duì)牛奶中碘醚柳胺殘留量進(jìn)行分析的方法。

關(guān)鍵詞：

牛奶，碘醚柳胺，固相萃取

1 實(shí)驗(yàn)過(guò)程

1.1儀器與試劑   

MPREP-SPE08手動(dòng)固相萃取裝置，貨號(hào)：PZ0008，北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司；

E.T.氮吹濃縮儀，貨號(hào)：C020017，北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司；

4500質(zhì)譜系統(tǒng)，SCIEX公司；

EZsepTM MAX固相萃取柱（60 mg/3mL，貨號(hào)：PZ12802），北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司；

冷凍離心機(jī)，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科學(xué)儀器廠  ；  

甲醇（色譜純），購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；

乙腈（色譜純），購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；

甲酸、氨水、三乙胺等化學(xué)品均為分析純或以上規(guī)格，購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2   工作液配制

碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：100mg/瓶，購(gòu)自壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心。

碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：取碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)品適量（相當(dāng)于有效成分約10mg），精密稱(chēng)取，用乙腈稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為1000μg/mL的碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)中間液：移取碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.1mL，用乙腈稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為10μg/mL的碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)中間液。

碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)使用液：碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)中間液0.1mL，用乙腈稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為0.1μg/mL的碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)使用液。

依次移取0.1μg/mL的碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)使用液0.02、0.1、0.5、2.0、5.0mL，分別置于10mL容量瓶中用甲醇定容至刻度，得到濃度依次為0.2μg/L、1μg/L、5μg/L、20μg/L、50μg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。

1.3 實(shí)驗(yàn)部分

1.3.1 樣品制備

 取牛奶試樣2g，置于50 mL聚丙烯離心管中，加10.0 mL 1%三乙胺乙腈溶液超聲提取10 min，8000 r/min離心5 min，收集上清液至另一50 mL離心管中，向殘?jiān)屑?/span>入8.0 mL 1%三乙胺乙腈溶液，重復(fù)提取一次，合并兩次上清液，用乙腈定容至20 mL，混勻，待凈化。

1.3.2 固相萃取凈化 

EZsepTM MAX固相萃取柱（60 mg/3mL，貨號(hào)：PZ12802）用5mL乙腈進(jìn)行活化，取1.3.1待凈化液5.0 mL上樣，上樣結(jié)束后用5mL乙腈淋洗萃取柱，再用5mL 5%甲酸乙腈洗脫萃取柱，收集洗脫液，使用E.T.氮吹濃縮儀在45℃下氮?dú)鉂饪s至近干，加2.0 mL甲醇渦旋混勻，過(guò)微孔濾膜后供LC-MS/MS測(cè)定。

1.3.3 LC-MS/MS儀器條件

色譜柱：Kinetex Luna PFP（2.6μm，3*100mm）

檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；

流動(dòng)相：A:0.1%氨水水溶液  B: 甲醇

流速：0.3mL/min

進(jìn)樣量：5μL

表1流動(dòng)相梯度洗脫表

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖1 標(biāo)液色譜圖

圖2 碘醚柳胺標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

3 結(jié)論 

本實(shí)驗(yàn)使用EZsepTM MAX固相萃取柱（60 mg/3mL，貨號(hào)：PZ12802）對(duì)牛奶中碘醚柳胺進(jìn)行凈化，通過(guò)高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行測(cè)定，該方法的加標(biāo)回收率范圍89.6%~95.3%，RSD為2.3%，能夠滿(mǎn)足標(biāo)準(zhǔn)要求。也說(shuō)明EZsepTM MAX固相萃取柱（60 mg/3mL，貨號(hào)：PZ12802）能很好的完成方法中的凈化工作，結(jié)果穩(wěn)定、可靠。

參考文獻(xiàn)

[1] 《動(dòng)物性食品中碘醚柳胺殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（征求意見(jiàn)稿）》

表 2   加標(biāo)回收率